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AAV在体自噬流检测


自噬简介

细胞自噬(autophagy or autophagocytosis):又称为Ⅱ型细胞死亡,是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene,Atg) 的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。


目前根据发生过程分为三类:Macroautophagy,Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA)。


● 大自噬(Macroautophagy):即我们说的自噬(autophagy);

● 微自噬(Microautophagy):是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分的一种方式;

● 分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy,CMA):一些分子伴侣,如hsp70,能帮助未折叠蛋白转位入溶酶体。通常说的自噬泛指Macroautophagy.



自噬的过程


1):细胞接受自噬诱导信号后,在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构,然后不断扩张,被称为Phagophore。


2):Phagophore不断延伸,将胞浆中的任何成分,全部揽入,然后“收口”,成为密闭的球状的autophagosome,即“自噬体”。


3):自噬体形成后,可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合(这种情况不是必然要发生的)。


4):自噬体与溶酶体融合形成autolysosome,期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解,2者的内容物合为一体,自噬体中的“货物”也被降解,产物(氨基酸、脂肪酸等)被输送到胞浆中供细胞重新利用,而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。



图1. 自噬的过程图



最有效的在体自噬流检测工具:AAV-mRFP-GFP-LC3


汉恒生物技术工程师构建RFP-GFP-LC3双标的腺相关病毒(AAV)载体,包装成双标的腺相关病毒,可在体观察自噬,实时检测自噬流的强弱,更加准确、清晰、直观!弥补了LC3自噬双标腺病毒在体转染的缺陷,并且可根据组织器官的亲和性,选择不同的AAV血清型,是最有效的载体自噬流检测工具!



图2. AAV-mRFP-GFP-LC3指示载体脑组织自噬流

(Cell Death Dis.2013 Nov 14;4:e917)



AAV载体不同血清型


研究发现 AAV 具有多种血清型,各种不同血清型的 AAV 载体的主要区别是衣壳蛋白不同,因此对不同的组织和细胞的转染效率存在差异。目前汉恒生物在包装腺相关病毒时有12 中不同的 AAV 血清型可供客户选择,建议客户针对不同组织器官选择相应血清型的 AAV 病毒,见表 1。



表1.12种不同血清型AAV对各组织器官细胞的亲和性


    



部分客户发表文献节选

● The immunoproteasome catalytic ?5i subunit regulates cardiac hypertrophy by targeting the autophagy protein ATG5 for degradation

   (杂志:SCIENCE ADVANCES,IF=12.804,大连医科大学附属第一医院)

● Endoplasmic reticulum stress induced by tunicamycin and thapsigargin protects against transient ischemic brain injury: Involvement of PARK2-dependent mitophagy

   (杂志:Autophagy,IF=11.059,浙江大学)

● BNIP3L/NIX-mediated mitophagy protects against ischemic brain injury independent of PARK2

   (杂志:Autophagy,IF=11.059,浙江大学)



AAV其他相关特色服务

1.      腺相关病毒AAV包装服务

2.    在体敲除AAV-SaCas9包装服务

3.    AAV光遗传技术服务


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