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单萤光素酶检测试剂盒


实验原理

萤火虫荧光素酶(firefly luciferase, fluc)能催化荧光素(luciferin)产生生物荧光反应,反应过程如下图所示。


特点:

1.底物存在时,催化底物发出萤光

2.萤光亮度和萤光素酶的量成正比


根据荧光强度,反应表达载体上F-luc的表达量

应用

转录因子结合位点与启动子活性分析

转录因子(Transcription factors,TF)是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子,转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合,从而增强其下游基因的表达。

荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子及其靶启动子中特异序列结合的重要手段




产品规格

实验步骤

一、配制试剂

1.1 Lysis Buffer:Lysis Buffer (5X) 用水稀释5倍,配制成工作液;

1.2. Luciferase Reaction Reagent:用Luciferase Reaction Buffer(5 ml)溶解Luciferase Reaction Substrate干粉,混匀后分装、避光保存,避免反复冻融。

二、裂解细胞

2.1 细胞裂解时密度应小于95%,细胞生长过密,易导致裂解不充分;质粒瞬转、病毒感染细胞后,需培养一段时间(一般48小时),使荧光素酶充分表达;调节实验参数,以满足上述条件;

2.2 去除培养基,用PBS润洗一遍,注意不要将细胞吹起;加入适量的Lysis Buffer。

2.3 将细胞培养板置于摇床上,室温、轻晃孵育15分钟;

2.4 将裂解物转移到新的EP管中,4oC、12,000rpm离心1分钟,取上清备用

三、荧光检测

取20μl裂解物,加入100μl平衡至室温的Luciferase Reaction Reagent,混匀后于酶标仪中检测fLuc信号。

汉恒萤光素酶(firefly)检测试剂盒具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点,是科研工作的优质工具!



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