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肿瘤干细胞分化技术服务

一、简介

近年来,肿瘤干细胞学说受到越来越多人的关注,并在白血病、乳腺癌、脑肿瘤、前列腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌、皮肤癌等多种恶性肿瘤中成功分离出肿瘤干细胞。

肿瘤干细胞可以说是肿瘤的种子和源泉,是肿瘤发生、扩散、复发等过程中的“起始细胞”或“动力细胞”,在肿瘤发生、发展、转移、复发过程中起关键作用。肿瘤干细胞的关键特性就是:自我更新和增殖分化能力。具有自我更新以及增殖分化维持肿瘤的能力,这也成为了体内体外鉴定肿瘤干细胞的金标准。





汉恒生物的专业的技术团队总结了肿瘤干细胞研究涉及到的一些常规技术服务,特推出肿瘤干细胞研究服务,可拨打免费咨询热线:400-092-0065



二、服务项目一览

   



1、CSCs分离:


1)流式/磁珠肿瘤干细胞标志物分选

已报道的肿瘤干细胞分子Marker如下图。运用流式细胞技术分选出其中的肿瘤干细胞。用于后期体内、体外功能研究。




2. 体外CSCs细胞功能检测与分析


A. 克隆形成能力与检测(培养板/软琼脂法)

     单个细胞在体外持续6代以上,其后代所组成的细胞群称为克隆。这时每个克隆大小在0.3-1.0 mm之间,含有50个以上的细胞,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力和分化潜力做定量、定性分析。




B. 细胞增殖与活力检测:CCK-8

     CCK-8试剂是新型唑类化合物能被细胞线粒体中的脱氢酶还原,被还原后的Formazan化合物具有高度水溶性,可直接用酶标仪在特定波长处测定吸收值。因还原生成的甲臜物数量与活细胞的数量成正比,可用于细胞增殖的检测。



C. Annexin V细胞凋亡检测

         正常肿瘤细胞中,磷酯酰丝氨酸(PS)主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞凋亡的早期,不同类型细胞的PS都会外翻到细胞表面,暴露在细胞膜外侧。

         Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白,具有易于结合磷脂类的特性,对PS有高度的亲和性。因此,Annexin V标记上荧光素可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS,从而检测处于早期凋亡的细胞。PS 外翻在凋亡早期、中期、晚期凋亡和坏死细胞中都能发生。但早期凋亡细胞的细胞膜是完好的,而中、晚凋和坏死细胞的细胞膜完整性已经丧失。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。

         因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。



D. 细胞周期检测(PI染色)

         碘化丙啶(Propidium, PI)为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸的双链螺旋的碱基之间,产生红色荧光。荧光强度和所嵌入的核酸含量成正比。通过流式细胞术检测PI荧光强度直接反映细胞各时相的DNA分布状态,从而计算出各周期时相的百分比。




3. 肿瘤侵袭/迁移能力检测


A. 划痕实验

细胞划痕是测定肿瘤细胞运动特性的方法之一,借鉴体外细胞致伤愈合实验模型,在体外培养的单层细胞上,划痕致伤,然后通过药物或者干扰手段观察肿瘤细胞的迁移能力。


B. 细胞迁移/侵袭(Transwell)

transwell小室是由24孔组织培养板和12孔细胞培养嵌入物组成,嵌入物(即小室)底层含有8 µm孔径大小的聚碳酸酯膜。实验时,上室为无血清细胞悬液,下室为含血清的培养基,血清中某些成分如一些细胞因子,对细胞生长来说是必不可少,因此细胞对这些因子具有趋向性,利用细胞的这种趋性促使细胞向下室转移,细胞发生迁移后会黏附于聚碳酸酯膜底部,以聚碳酸酯膜底部细胞数量来显示细胞转移能力,不同细胞在此会显示不同的运动转移能力。





4. 分子机制研究


A. 信号通路验证(QPCR/WB)

通过QPCRWB对组织或细胞样品中的多种信号通路进行实验验证,避免芯片或二代测序结果出现假阳性。专用于对各种信号通路相关基因进行表达量差异定量检测。






B. 基因过表达或干扰(质粒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒载体)

汉恒生物拥有质粒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒等多种基因转导工具,解决一切体内或体外基因转导难题。






C. 基因敲除或敲入(cas9质粒、慢病毒、腺病毒和腺相关病毒载体)

汉恒生物拥有质粒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒cas9工具系统和检测系统,解决一切体内或体外基因编辑难题。





D. 非编码RNA(lncRNA、microRNA、circRNA)靶基因预测与验证

  利用专业软件预测lncRNA、microRNA、circRNA之间,以及非编码RNA与靶基因的结合位点,并设计相应实验验证预测结果。


       采用Promega公司特有psiCHECK和PGL3-basic质粒,利用Luciferase双荧光报告系统,采用瞬时转染技术,操作简便、快速,周期短,适用于绝大多数细胞类型。


5. 小鼠体内成瘤实验

         裸鼠是随着近代医学的发展,特别是肿瘤学和免疫学研究的需要,人体肿瘤移植于免疫缺陷动物(裸鼠),能反映肿瘤干细胞的自我更新和强增殖能力生物学特性,对研究人体肿瘤恶性程度、治疗非常重要。


        汉恒生物科构建基因过表达或者沉默稳转细胞株,将稳转细胞株移植到裸鼠皮下或原位,反映肿瘤干细胞的自我更新能力和恶性增殖能力的生物学特性。




三 、服务优势

1. 专业的肿瘤干细胞技术团队,提供科研思路、实验技术整体服务!

2. 丰富的科研实验经验,让实验更稳定!结果更可靠!文章更高分!


参考文献:

1. Suventha Moodley,Neil A. Koorbanally,Thrineshen Moodley.The 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay is a rapid, cheap, screening test for the in vitro anti-tuberculous activity of chalcones. Journal of Microbiological Methods. 2014,104:72–78.


2. A novel assay for apoptosis Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V..Journal of Immunological Methods


3. Rapid flow cytofluormetric analysis of mammalian cells by propidium iodide staining. J. Cell. Biol.


4. Multiplex Genome Engineering Using CRISPR/Cas Systems.Science.


5. In vivo genome editing using Staphylococcus aureus Cas9.Nature.






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