众所周知，慢病毒在基因转导领域的应用十分的广泛，慢病毒可有效感染分裂和非分裂细胞，适合几乎所有细胞系，如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等，能够方便快捷地实现基因的长期、稳定表达。
汉恒生物的产品已有上千篇SCI期刊引用，包括CELL、Nature Medicine等期刊。下面就分享一下近期使用汉恒的慢病毒产品发表的文章~
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期刊：Nature Communication （IF= 11.878）
客户单位：北京大学-香港科技大学医学中心（北京大学深圳医院）
文章名：Multi-region sequencing unveils novelactionable targets and spatial heterogeneity in esophageal squamous cellcarcinoma
使用产品：干扰慢病毒，感染食管鳞状细胞敲低癌细胞系内BRCA1/2表达
本研究通过对39名食道鳞状细胞癌（ESCC）患者的肿瘤区域、正常组织和血液样本进行全外显子组及T细胞受体谱的组学分析，发现12.8% 食道鳞状瘤患者体内 ERBB4 基因有突变，同时功能实验也证实其致癌作用；另外通过对508名的食道鳞状细胞癌患者的全基因测序分析，发现18%患者体内BRCA1 / 2双等位基因的变异失活与高水平的signature 3相关。作者通过慢病毒筛选BRCA1 / 2 shRNA食道鳞状细胞癌细胞系 (KYSE410 and ZEC-014-1)，发现下调BRCA1 / 2可以显著提高ESCC细胞对顺铂的敏感性；研究也表明5％的患者CD274基因存在局部高水平扩增，导致PD-L1的大量的表达，这类患者可能对免疫检查点阻断更敏感，基因组和TCR谱系肿瘤内异质性之间存在紧密的相关。综和以上发现，该研究揭示了食管鳞癌的高度异质性，确定了ERBB4、BRCA1/2和PD-L1这几个潜在的治疗靶点，可能为食管鳞癌治疗提供新的策略。
图1 BRCA1/ 2信号可作为ESCC的潜在治疗靶标
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期刊：EMBO reports（IF=8.383）
客户单位：华南农业大学
文章名：Succinate induces skeletal muscle fiber remodeling via SUNCR1 signaling pathway
使用产品：慢病毒，小鼠腓肠肌肌内多点注射
本研究发现日粮中补充琥珀酸能引起骨骼肌纤维从快肌（白肌）向慢肌（红肌）转化，提高小鼠的运动耐力。为了确定SUNCR1在体内琥珀酸诱导的骨骼肌纤维转换中的作用，作者构建了全身性敲除SUNCR1的小鼠，同时通过特异性SUNCR1 siRNA慢病毒注射构建腓肠肌特异性SUNCR1敲低小鼠模型，证明肌肉SUNCR1在琥珀酸酯诱导的骨骼肌纤维重塑中不可或缺的作用。此外本研究还表明琥珀酸的作用机制主要通过SUNCR1及CaN/NFAT信号通路介导。该研究不仅有助于全面认识肌肉生物活性代谢中间产物的生理功能，而且也有望研制提高特定人群（如运动员和久坐者）运动能力和健康状况以及改善畜禽肉品质的新型生理调节剂。
图2 腓肠肌特异性SUNCR1敲除消除了琥珀酸酯对体内肌肉纤维转换的影响
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期刊：Molecular Cancer（IF= 10.679）
客户单位：山东大学
文章名：Exosome-transmitted miR-128-3p increase chemosensitivity of oxaliplatin-resistant colorectal cancer
使用产品：pHB-U6-MCS-CMV-ZsGreen-PGK-PURO，细胞模型：HCT116OxR （MOI 20）和HT29OxR细胞（MOI15）
本研究利用稳定的奥沙利铂抗性CRC细胞系，通过体外和体内研究显示miR-128-3p可以抑制EMT并增加细胞内奥沙利铂积累，并且较低的miR-128-3p表达与晚期人CRC患者中较差的奥沙利铂反应有相关性。实验中用慢病毒载体过表达miR-128-3p并感染FHC细胞，有效地将miR-128-3p包装到分泌的外泌体中从而介导miR-128-3p递送至奥沙利铂抗性细胞，改善了体外和体内CRC细胞的奥沙利铂反应。同时研究还表明miR-128-3p过表达可以通过抑制耐药细胞中的Bmi1表达来上调E-钙粘蛋白水平，并抑制奥沙利铂诱导的EMT；另外miR-128-3p过表达可以抑制药物转运蛋白MRP5的表达来降低奥沙利铂流出量。以上结果揭示了外泌体递送miR-128-3p通过靶向影响Bmi1和MRP5的表达，增强CRC中的化学敏感性的新策略，miR-128-3p有望成为结直肠癌基于奥沙利铂化疗的的诊断和预后标志物。
图3 miR-128-3p在CRC细胞系中的表达及其对奥沙利铂耐药性的影响
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期刊：Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle（IF=10.754）
客户单位：华南农业大学
文章名：LncIRS1 controls muscle atrophy via sponging miR-15 family to activate IGF1-PI3K/AKT pathway
使用产品：慢病毒，鸡胸肌肌内注射
本研究通过RNA-seq和原位杂交技术，发现家鸡胸肌和腿肌特异表达的长链非编码RNA lncIRS1。结合miRNA和mRNA表达谱，构建了lncRNA-miRNA-mRNA互作网络。LncIRS1通过吸附miR-15家族，促进IRS1基因表达，激活IGF1-PI3K/AKT信号通路，进而促进家鸡成肌细胞的增殖和分化。此外鸡活体内，研究人员利用利用慢病毒过表达以及敲低lncIRS1，发现过表达lncIRS1后鸡胸肉质量以及肌肉纤维横面积增加，反之则减少。同时过表达lncIRS1可激活AKT-FOXO信号通路，与细胞实验一致。以上细胞及鸡活体实验证实了lncIRS1可以调控家鸡肌肉纤维肥大。
图4 LncIRS1在鸡体内调节肌肉质量和平均肌纤维
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期刊：CANCER RESEARCH（IF=8.378）
客户单位：天津医科大学
文章名：LINE-1 Retrotransposition Promotes the Development and Progression of Lung Squamous Cell Carcinoma by Disrupting the Tumor Suppressor Gene FGGY
使用产品：慢病毒，FGGY过表达及干扰慢病毒细胞模型：NCI-H520
本研究通过分析来自TCGA中的LUSC样本的转录组和LUSC的临床病理特征，发现L1-FGGY与肺鳞癌患者具有显著的相关性，吸烟可诱导LINE-1启动子低甲基化，以及脂质代谢紊乱和免疫微环境改变。为了进一步探究L1-FGGY和FGGY在肺鳞癌细胞的致癌和细胞增殖中的作用，本文利用过表达L1-FGGY和sh-FGGY敲低慢病毒，证实无论是在肺鳞癌细胞体外实验还是在异种移植肺鳞癌细胞到NOD-SCID小鼠的体内实验，过表达L1-FGGY或者下调FGGY都会促进细胞增殖和入侵，同时在体内促进肿瘤形成的同时导致细胞免疫因子转录和代谢功能缺失。另外通过反转录抑制剂NVR和EFV抑制L1-FGGY，可以降低肿瘤的生长、改善肿瘤细胞的局部免疫逃逸并恢复一定代谢功能。这些结果证明低甲基化诱导的L1-FGGY表达促进了LUSC发生和发展，有希望成为LUSC的一个预测性生物标记物和治疗靶点。
图5 FGGY过表达及敲低在体内外致癌作用
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