自噬LC3双标慢病毒

 

自噬LC3双标慢病毒产品参数 

 

 

自噬简介

 

细胞自噬(autophagy or autophagocytosis)：又称为Ⅱ型细胞死亡，是细胞在自噬相关基因(autophagy related gene，Atg)的调控下利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程。

比利时科学家Christian de Duve在上世纪50年代经过电镜察看到自噬体（autophagosome）构造，并且在 1963 年溶酶体国际会议上首先提出了“自噬”这种说法。因而Christian de Duve被公以为自噬研讨的鼻祖。Christian de Duve 也因发现溶酶体，于1974年取得诺贝尔奖。

 

 

目前根据发生过程分为三类：Macroautophagy，Microautophagy和Chaperone-mediated autophagy CMA)。

 

●　大自噬（Macroautophagy）：即我们说的自噬（autophagy）;

●　微自噬（Microautophagy）：是指溶酶体主动、直接吞噬胞浆成分的一种方式;

●　分子伴侣介导的自噬 (Chaperone-mediated autophagy，CMA)：一些分子伴侣，如hsp70，能帮助未折叠蛋白转位入溶酶体。通常说的自噬泛指Macroautophagy.

 

 

自噬的过程

 

1）：细胞接受自噬诱导信号后，在胞浆的某处形成一个小的类似“脂质体”样的膜结构，然后不断扩张，被称为Phagophore。
2）：Phagophore不断延伸，将胞浆中的任何成分，全部揽入，然后“收口”，成为密闭的球状的autophagosome，即“自噬体”。
3）：自噬体形成后，可与细胞内吞的吞噬泡、吞饮泡和内体融合（这种情况不是必然要发生的）。
4）：自噬体与溶酶体融合形成autolysosome，期间自噬体的内膜被溶酶体酶降解，2者的内容物合为一体，自噬体中的“货物”也被降解，产物（氨基酸、脂肪酸等）被输送到胞浆中供细胞重新利用，而残渣或被排出细胞外或滞留在胞浆中。

 

 

自噬的调控

 

一、依赖mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶点）途径的自噬

1）PI3K-AKT-mTOR信号通路

2）AMPK-TSC 1/2-mTOR 信号通路

 

二、其它的信号通路

1）3-甲基腺嘌呤（3-MA）通过抑制Class Ⅲ PI3K的活性抑制自噬。

2）beclin1和UVRAG作为正调控子，抗凋亡因子bcl-2作为负调控子共同参与组成Class Ⅲ PI3 复合物调控自噬。

3）GTP结合的G蛋白亚基Gαi3抑制自噬；GDP结合的Gαi3蛋白活化自噬。

4）死亡相关蛋白激酶（death-associated protein linase,DAPK）和DAPK相关蛋白激酶（DAPK-related protein kinase-1,DRP-1）诱导自噬。

5）PKA、casein激酶 Ⅱ、MAP激酶、calcium途径也在自噬错综复杂的调控网格中，但其机制还不甚清楚。

 

 

 

 

自噬与疾病

 

1、自噬与代谢

自噬能清除不正常构型的蛋白质，并消化受损和多余的细胞器，是真核细胞中广泛存在的降解/再循环系统。在细胞新陈代谢、结构重建、生长发育中起着重要作用。在饥饿和新生儿早期，自噬作用明显加强，自噬体显著增多。

 

2、自噬与肿瘤

细胞自噬与肿瘤的关系十分复杂，目前尚未完全阐明。一方面，正常细胞自噬增强，可表现出抑制肿瘤发生的功能；与此相反，抑制细胞自噬有潜在的致瘤可能。另一方面，肿瘤细胞也可通过增强细胞自噬来对抗由缺氧、代谢产物、治疗药物诱导的应激反应。

  

 

汉恒自噬产品与服务

 

自噬抑制剂

1）3-Methyladenine（3-MA）：（Class III PI3K） hVps34 抑制剂
2）Bafilomycin A1：质子泵抑制剂
3）Hydroxychloroquine（羟氯喹）

 

自噬相关抗体

1）A14292,Premo自噬TB/ GFP TR-FRET LC3B抗体试剂盒

2）Anti-MAP1A/LC3A/B 自噬微管相关蛋白轻链3抗体

3）Anti-MAP1LC3A(microtubule-associated protein 1 light chain 3)  自噬微管相关蛋白轻链3抗体

4）兔抗人、大、小APG4B细胞自噬相关抗体\ Anti-APG4B/AUTL1

5）自噬微管相关蛋白轻链3抗体\ Anti-MAP1LC3A

6）Anti-SQSTM1 / p62 antibody

汉恒生物已开发并完善了多套自噬相关的研究体系和工具,并积累了丰富的自噬研究经验

 

 

汉恒独家推出双荧光LC3细胞自噬慢病毒 

 

双荧光指示体系原理

 

 

mRFP 用于标记及追踪LC3，GFP 的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体，即由于GFP 荧光蛋白对酸性敏感，当自噬体与溶酶体融合后GFP 荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光。

 

我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体,通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱。

如下图:细胞转染mRFP-GFP-LC3病毒后给予氨基酸剥夺处理2小时后出现明显增强的自噬以及自噬流。

 

红色斑点是自噬溶酶体（mRFP），黄色斑点是自噬体（RFP+GFP）. 通过不同颜色斑点的计数可以清晰看出自噬流的强弱，实时监测自噬发生过程，准确，清晰，直观！

 

 

部分客户发表文献节选：

 

●　Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy

   （杂志：CELL，IF=36.216，上海交通大学附属仁济医院）

●　Melatonin ameliorates hypoglycemic stress-induced brain endothelial tight junction injury by inhibiting protein nitration of TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator

   （杂志：journal of pineal research，IF=15.211，浙江大学）

●　The immunoproteasome catalytic ?5i subunit regulates cardiac hypertrophy by targeting the autophagy protein ATG5 for degradation

   （杂志：SCIENCE ADVANCES，IF=12.804，大连医科大学附属第一医院）

●　Sirt6 deficiency exacerbates podocyte injury and proteinuria through targeting Notch signaling

   （杂志：Nature Communications，IF=11.878，山东大学）

●　TRB3 links insulin/IGF to tumour promotion by interacting with p62 and impeding autophagic/proteasomal degradations

   （杂志：Nature Communications，IF=11.878，北京协和医院）

●　Endoplasmic reticulum stress induced by tunicamycin and thapsigargin protects against transient ischemic brain injury: Involvement of PARK2-dependent mitophagy

   （杂志：Autophagy，IF=11.059，浙江大学）

●　PSMD10/gankyrin induces autophagy to promote tumor progression through cytoplasmic interaction with ATG7 and nuclear transactivation of ATG7 expression

   （杂志：Autophagy，IF=11.059，第二军医大学附属东方肝胆医院）

●　Mir143-BBC3 cascade reduces microglial survival via interplay between apoptosis and autophagy: Implications for methamphetamine-mediated neurotoxicity

   （杂志：Autophagy，IF=11.059，东南大学）

●　BNIP3L/NIX-mediated mitophagy protects against ischemic brain injury independent of PARK2

   （杂志：Autophagy，IF=11.059，浙江大学）

●　Ai-lncRNA EGOT enhancing autophagy sensitizes paclitaxel cytotoxicity via upregulation of ITPR1 expression by RNARNA and RNA-protein interactions in human cancer

   （杂志：molecular cancer，IF=10.679，哈尔滨医科大学）

●　Iron oxide nanoparticles promote macrophage autophagy and inflammatory response through activation of toll-like Receptor-4 signaling

   （杂志：Biomaterials，IF=10.273，四川大学）

●　The lncRNA HOTAIRM1 regulates the degradation of PML-RARA oncoprotein and myeloid cell differentiation by enhancing the autophagy pathway

   （杂志：Cell Death and Differentiation，IF=8.339，中山大学）

●　PrLZ increases prostate cancer docetaxel resistance by inhibiting LKB1/AMPK-mediated autophagy

   （杂志：Theranostics，IF=8.063，西安交通大学）