感染部位:脊髓神经
1、麻醉-皮下注射麻醉剂 Xylazin/Ketamine 混合液(10mg/kg,100 mg/kg )(Xylazin/Ketamine,Sigma-Aldrich X1251, K2753)。
2、在小鼠的眼睛上涂上眼药膏(Oculentum simplex, Teva Pharmachemie),防止眼睛干掉。
3、靠近小鼠的尾部根部约2cm2皮肤去毛,以利于清晰看见下针部位。
4、把小鼠放到一个特殊的架子上,在小鼠下本身用一根15ml离心管垫起,从而使下针部位稍微拱起。
5、把病毒吸入25微升的hamilton,配30G针头。
6、定位脊椎的L6(最突出的一个),并用手指轻轻按压使之平缓。
7、小心将针头插入L5椎骨和L6椎骨的凹槽之间,并注意小鼠尾部会稍微上翘,这标志针头成功插入髓鞘。
8、一旦成功插入,用手指固定针头,另一只手缓慢注射5-10微升病毒。注意注射体积要适当,太小会加大实验误差,体积太大会增加鞘内压力。
9、如有需要,24hr之后可重复注射一次。
10、实验完毕需要保持小鼠身体足够温暖(比如37度加热灯、温箱等),以利于苏醒。