脑立体定位注射

1、麻醉-皮下注射麻醉剂Xylazin/Ketamine 混合液（10mg/kg, 100 mg/kg ）（Xylazin/Ketamine，Sigma-Aldrich X1251, K2753）。

2、剃除小鼠头部眼睛到耳朵之间的毛发，放到立体定位仪的保暖托盘上。

3、归零牙齿和耳朵的标尺。并在小鼠的眼睛上涂上眼药膏（Oculentumsimplex， Teva Pharmachemie），防止眼睛干掉。

4、将小鼠上门牙固定到固定板的槽内，确保头部保持固定。调节Bregma和Lambma在同一矢状线上和水平面。务必确保小鼠鼻子居中、稳定。

5、用手术刀花开小鼠头部皮肤，用手术刀刮掉表面硬脑膜，如有血迹请用棉签擦干，确保bregma 和lambda位置清晰可见（加示意图）。

6、把bregma 坐标归位0（X，Y，Z=0），确保lambda位置与bregma位于同意水平面上。

7、根据目的脑区设定好坐标。一旦坐标固定，用marker笔在颅骨做出标记，并在10秒内在颅骨钻出一个约0.015mm的孔。钻的过程务必小心，以防损伤脑组织。

8、把带注射AAV吸入针内，根据上一步设好的坐标进针。进针完成后以0.05-0.1 微升/min的速度缓缓注射病毒，通常一只小鼠注射体积在0.05-2微升之间。

9、注射完毕，保持10min，然后慢慢回针。

10、操作过程中如有血流出需要用棉签及时吸干。

11、缝合头皮。实验完毕需要保持小鼠身体足够温暖（比如37度加热灯、温箱等），以利于苏醒。