肝门静脉注射

1、麻醉-皮下注射麻醉剂 Xylazin/Ketamine 混合液（10mg/kg, 100 mg/kg ）（Xylazin/Ketamine，Sigma-Aldrich X1251, K2753）。

2、在小鼠的眼睛上涂上眼药膏（Oculentum simplex， Teva Pharmachemie），防止眼睛干掉。

3、小鼠仰卧，腹部朝上。将第二肋骨和第四乳头之间的区域脱毛处理。这步操作可以在小鼠清醒状态下提前1天完成。

4、对去毛区域反复消毒。然后用手术刀划开从肋骨到第四乳头区域，长度约3cm。注意不要伤及乳腺、肠道、肝脏等其他组织。

5、用消毒棉签小心把大小肠等内脏拉出来，并用纱布轻轻遮盖，防止触碰。直到看清肝门静脉。

6、病毒事先吸入32g针头注射器，在肝脏下方距离约1cm的位置，以小于5度的夹角沿着肝门静脉缓缓插入肝门静脉3-5 mm（肝门静脉示意图，如果难以看清，可以借助解剖镜辨识）。

7、然后缓缓注射病毒。注射完成停留3-5s再拨出针头，并用棉签轻轻按压片刻。然后用止血棉覆盖肝门静脉，用棉签轻轻按压5min协助止血。这一步务必确保止血完成，否则继续按压，直至止血完成。

8、然后去除止血棉（如果止血棉粘连组织严重可以用灭菌PBS湿润）。

9、然后把拉出的脏器轻轻归位。4-0线缝合伤口，10-15针。

10、伤口部位注射100 μl bupivacaine (5 mg/ml)止疼；并用26G胰岛素针皮下注射500 微升无菌PBS进行水合。整个手术耗时30min左右。

11、实验完毕需要保持小鼠身体足够温暖（比如37度加热灯、温箱等），以利于苏醒。