T细胞专用腺病毒

 

原代T细胞的基因操作利器

 

T细胞及其特性简介

 

T细胞(T cell、T淋巴細胞/T lymphocyte)是淋巴细胞的一种，在免疫反应中扮演着重要的角色。T细胞在胸腺内分化成熟，成熟后移居于周围淋巴组织中。随着细胞免疫治疗的日益深入，T细胞的基因工程化改造显得越来越重要。

然后，T细胞的基因操作却异常困难，普通的DNA质粒很难转染，即使是病毒介导的基因转染操作，也有不少难题，主要体现在几个方面:

 

1.常规的慢病毒、逆转录病毒，由于1）T细胞膜上受体的不稳定；2）非激活的T细胞本身无增殖能力；3）T细胞内部有阻碍反转录的机制等原因而导致慢病毒和逆转录病毒的T细胞感染能力偏弱，需要多次重复感染，且对于实验操作的条件要求十分苛刻。

 

2.体外培养的T细胞本身十分敏感且脆弱，慢病毒感染对细胞的状态影响非常大。

 

3.T细胞是悬浮细胞，进一步增大了病毒有效的难度。

 

 

汉恒原代T细胞感染实例——使用悬浮细胞专用腺病毒ads感染

 

悬浮细胞专用腺病毒Ads感染小鼠原代CD4+ T细胞

 

 

细胞：小鼠原代CD4+ T细胞

刺激方式：CD3/CD28抗体和IL-2激活48h

病毒：Ads-GFP, 1×10^10 PFU/ml

使用方式：MOI=500

 

 

悬浮细胞专用腺病毒Ads感染人原代CD4+ T细胞

 

 

细胞：人原代CD4+ T细胞

刺激方式：CD3/CD28抗体和IL-2激活48h

病毒：Ads-GFP， 1×10^10 PFU/ml

使用方式：MOI=100

 

 

汉恒原代T细胞感染实例——使用慢病毒和逆转录病毒感染

 

原代T细胞专用病毒-慢病毒感染人原代CD4+ T细胞

 

 

细胞：人原代CD4+ T细胞

刺激方式：CD3/CD28抗体和IL-2激活48h

病毒：hTLv-GFP，1*10^8 TU/ml

使用方式：MOI=50

 

原代T细胞专用病毒-逆转录病毒感染小鼠原代CD4+ T细胞

 

 

细胞：小鼠原代CD4+ T细胞

刺激方式：CD3/CD28抗体和IL-2激活48 h

病毒：T细胞专用逆转录病毒mTRv-GFP，1×108 TU/ml

使用方式：MOI=100

 

 

 参考文献

 

   1、Laterodorsal tegmentum interneuron subtypes oppositely regulate olfactory cue-induced innate fear；

     （2016年发表于Nature Neuroscience，作者：段树民）

   2、Endoplasmic reticulum stress induced by tunicamycin and thapsigargin protects against transient ischemic brain injury Involvement of PARK2-dependent mitophagy；

     （2016年发表于Autophagy作者：Xiangnan Zhang）

   3、SNX13 reduction mediates heart failure through degradative sorting of apoptosis repressor with caspase recruitment domain；

     （2016年发表于Nature Communications，作者：陈义汉）

   4、TRB3 links insulin IGF to tumour promotion by interacting with p62 and impeding autophagic proteasomal degradations；

     （2016年发表于Nature Communications，作者：胡卓伟）

   5、Suppression of KRas-mutant cancer through the combined inhibition of KRAS with PLK1 and ROCK；

     （2016年发表于Nature Communications，作者：刘明耀）

   6、POH1 deubiquitylates and stabilizes E2F1 to promote tumour formation；

     （2015年发表于Nature Communications，作者：Yongzhong Liu）

   7、LRP6 acts as a scaffold protein in cardiac gap junction assembly；

     （2016年发表于Nature Communications，作者：陈义汉）

   8、Long-Range Chromosome Interactions Mediated by Cohesin Shape Circadian Gene Expression；

     （2016年发表于plos genetics，作者：Jun Yan ）

   9、Histone deacetylase 4 selectively contributes to podocyte injury in diabetic nephropathy；

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   10、Roles of miR-1-1 and miR-181c in ventricular septal defects；

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   12、Interleukin-1β induces autophagy by affecting calcium homeostasis and trypsinogen activation in pancreatic acinar cells；

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   13、MicroRNA-1 functions as a potential tumor suppressor in osteosarcoma by targeting Med1 and Med31；

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   18、MicroRNA-204-5p–Mediated Regulation of SIRT1 Contributes to the Delay of Epithelial Cell Cycle Traversal in Diabetic Corneas；

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   20、The Relevance of Nrf2 Pathway and Autophagy in Pancreatic Cancer Cells upon Stimulation of Reactive Oxygen Species；

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   23、Effects of insulin-like growth factor-1 on the assembly and secretion of very low-density lipoproteins in cow hepatocytes in vitro；

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   24、SIRT6 suppresses isoproterenol-induced cardiac hypertrophy through activation of autophagy；

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   25、Transcription factor E2-2 inhibits the proliferation of endothelial progenitor cells by suppressing autophagy；

     （2016年发表于International Journal of Molecular Medicine，作者：Hong Wang）

   26、Effect of adenovirus-mediated RNA interference of IL-1β expression on spinal cord injury in rats；

     （2016年发表于Spinal Cord）

   27、miR-23b-3p regulates the chemoresistance of gastric cancer cells by targeting ATG12 and HMGB2；

     （2016年发表于Cell Death and Disease，作者： Q Zhao）

   28、Adipose-derived stem cells induce autophagic activation and inhibit catabolic response to pro-inflammatory cytokines in rat chondrocytes；

     （2016年发表于Osteoarthritis and Cartilage，作者： Jian Zhang）

   29、β-Arrestins promote podocyte injury by inhibition of autophagy in diabetic nephropathy；

     （2016年发表于 Cell Death and Disease，作者：F Yi ）

   30、MicroRNA-30a downregulation contributes to chemoresistance of osteosarcoma cells through activating Beclin-1-mediated autophagy；

     （2016年发表于Oncology Reports，作者：Lifeng Lao）

   31、Luteolin alleviates post‐infarction cardiac dysfunction by up‐regulating autophagy through Mst1 inhibition；

     （2016年发表于J. Cell. Mol. Med.，作者：Dongdong Sun ）

   32、Long non-coding RNA HNF1A-AS1 functioned as an oncogene and autophagy promoter in hepatocellular carcinoma through sponging hsa-miR-30b-5p；

     （2016年发表于Biochemical and Biophysical Research Communications，作者： Jiahong Dong）

   33、Gambogic acid enhances the radiosensitivity of human esophageal cancer cells by inducing reactive oxygen species via targeting Akt/mTOR pathway；

     （2015年发表于Tumor Biology，作者：Xinchen Sun）

   34、Long non-coding RNA HNF1A-AS1 functioned as an oncogene and autophagy promoter in hepatocellular carcinoma through sponging hsa-miR-30b-5p；

     （发表于Biochemical and Biophysical Research Communications，作者：Jiahong Dong）

   35、miR-186 inhibits cell proliferation in multiple myeloma by repressing Jagged1；

     （2016年发表于Biochemical and Biophysical Research Communications，作者：Jun Peng）

   36、House dust mite extract induces growth factor expression in nasal mucosa by activating the PI3K/Akt/HIF-1α pathway；

     （2016年发表于Biochem Biophys Res Commun，作者：Zhou H）

   37、构建大鼠白细胞介素1β 基因shRNA 腺病毒载体；

     （2015年发表于中国组织工程研究 ）

   38、Aldehyde dehydrogenase 2 activation in aged heart improves the autophagy by reducing the carbonyl modification on SIRT1；

     （2016年发表于Oncotarget，作者：Heng Ma）

   39、A novel role of microRNA 17-5p in the modulation of circadian rhythm；

     （2016年发表于Sci Rep，作者：Ji-Min Cao ）

   40、Excess iodine promotes apoptosis of thyroid follicular epithelial cells by inducing autophagy suppression and is associated with Hashimoto thyroiditis disease；

     （2016年发表于J Autoimmun，作者：Xiao Y）