产品信息
产品简介
Polybrene(聚凝胺)是一类高价离子季铵盐多聚物，溶解后带正电，与细胞表面的阴离子结合，能显著提高逆转录病毒对细胞的感染效率。一般能提高感染效率2～10倍。Polybrene目前广泛用于逆转录病毒介导的哺乳动物细胞转染。。但Polybrene对某些细胞也是存在毒性的，因此，使用之前要先对细胞进行测试。
另外Polybrene也用于蛋白测序，小剂量的Polybrene在自动测序分析中可明显改善多肽的降解现象。PVDF膜加入polybrene还能提高膜的亲和性。
使用方法
1. 慢病毒感染
⑴ 第一天按实验需要将细胞铺板（比如24孔板）。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。
⑵ 第二天感染前，从-80℃冰箱取出病毒后冰浴融化，参考相关文献或者根据预实验得到的MOI值用新鲜完全培养基将病毒稀释成所需浓度。注意：轻轻混匀，不要使用振荡器。
⑶ 吸去细胞原有培养基，将按照MOI稀释好的病毒液+培养基+ Polybrene（对于293细胞，终浓度6μg/ml）加入细胞中，轻轻摇匀。37℃培养过夜
注：病毒液-培养基- Polybrene混合液，按如下操作制备混合液：①添加完全培养基（60mm培养皿2ml，100mm培养皿3ml），37°C预热；②加入病毒轻轻混匀；③加入Polybrene至终浓度为2μg-12μg/ml。轻轻混匀。以上每个成分需要按顺序加入。当MOI高于20时 ，我们建议客户添加Polybrene（终浓度2~12μg/ml，浓度因不同的细胞而异，具体的请参考相关文献）来提高病毒的感染效率。如果感染目的细胞是Jurkat，kasumi，NB4，H929，GBC-SD，MCF-7等，建议不要添加Polybrene；大部分原代细胞感染也不需要添加Polybrene，以上仅供参考。
⑷ 感染48小时后，吸除含慢病毒的培养基，换为新鲜的培养基。
⑸ 继续培养24~48小时后，根据需要收集细胞检测目的蛋白的表达。
2. 质粒转染
⑴ 第一天按实验需要将细胞铺板（比如24孔板）。细胞数以第2天密度约50%为宜。37℃ 培养过夜。
⑵ 准备DNA-培养基- Polybrene混合液（具体加入方法与慢病毒转染相同）。
⑶ 去除培养基，在细胞中加入DNA-培养基-Polybrene溶液，在37°C孵育细胞6-20h。
⑷ 去除DNA-培养基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution（15%DMSO in 1X HBSS）轻轻盖住细胞（60mm培养皿3ml，100mm培养皿4ml）。每次加入溶液时用手轻晃培养盘10s，使得液体均匀分布。然后37°C孵育细胞4min。
⑸ 立即去除DMSO shock solution，用完全生长培养基轻轻清洗细胞2次。对于60mm培养皿每次用5ml培养液清洗，100mm培养皿每次用10ml培养液清洗。
⑹ 加入完全培养基到细胞中，根据需要进行后续实验。
注意事项
1. 使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个实验，应规范操作包括反应体系的配制、样本处理及加样。
3. 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
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