过表达慢病毒

一、目的基因及慢病毒载体的获得

1.获取目的基因

（1）客户提供目的基因模板；

（2）针对客户目的基因的CDS序列（从NCBI中查得）信息合成目的基因序列。

2. 基因慢病毒载体构建

将获得的目的基因的CDS区通过酶切、连接，克隆入慢病毒载体中，进行测序鉴定。

汉恒生物多年来构建了各种用于各种用途的过表达慢病毒载体（HanBioTM）。

二、目的基因过表达慢病毒载体的包装和浓缩

1.慢病毒载体的大量包装

大量扩增带有目的基因的慢病毒载体和慢病毒的两个辅助质粒，将三个质粒按一定比例大量转染293T细胞，进行慢病毒颗粒的大量包装。

2.慢病毒的浓缩

包装48小时后收集病毒，并对病毒进行体外大比例浓缩，得到有效滴度为10^8PFU/ml的慢病毒颗粒。

客户提供：目的基因模板或序列

汉恒最后提供： 1ml过表达慢病毒和1毫升对照慢病毒，滴度均为10^8。