过表达腺病毒

服务流程

1、获取目的基因

（1）客户提供目的基因模板；

（2）针对客户目的基因的CDS序列（从NCBI中查得）信息合成目的基因序列。

2、腺病毒骨架质粒的构建与病毒包装

将合成的目的基因与穿梭质粒进行构建，然后大量扩增穿梭质粒和腺病毒骨架质粒，并将腺病毒穿梭质粒与腺病毒骨架质粒同时转染入293A细胞进行重组和腺病毒初步包装。

汉恒生物多年来构建了各种用于各种用途的过表达腺病毒载体（HanBioTM）。

3、腺病毒的包装出毒与少量扩增

待包装细胞出现腺病毒感染特异性细胞病变（CPE，约15天），挑取细胞病变斑块，转入新鲜293A细胞中进行病毒少量扩增。至细胞再次出现CPE，收集细胞及上清，反复冻融三次收集病毒，以此病毒为P1代病毒。

4、腺病毒的大量扩增和浓缩

以P1代腺病毒感染293A细胞，连续进行三代感染，至P4代进行腺病毒的大量扩增，待CPE后收集病毒并对病毒进行体外大比例浓缩，得到有效滴度为1010PFU/ml的带有目的基因的腺病毒颗粒。

5、腺病毒纯化（动物实验可选）

如需直接进行动物实验，则需要进行腺病毒的纯化。准备30-40大盘293A细胞，腺病毒感染至CPE后收集病毒（方法同上），体外用CsCl密度梯度离心法进行腺病毒的纯化，得到有效滴度为10^11PFU/ml的带有目的基因的腺病毒颗粒。

客户提供： 目的基因模板或序列

汉恒最后提供： 1ml非纯化的过表达慢病毒和1毫升对照慢病毒，滴度均为10^10（或纯化的为10^11）