干扰慢病毒

汉恒生物拥有专业的技术人员，为您构建包装的干扰慢病毒，保证其干扰效率不低于70%，包装流程如下：

一、目的基因干扰序列的设计与合成

1.shRNA序列设计与合成

（1）客户提供干扰序列；

（2）或者由汉恒专业技术人员来设计。针对目的基因汉恒代为设计并合成三对特异性的siRNA序列，根据siRNA序列设计对应茎环结构的shRNA序列，然后合成三对shRNA序列（结果中保证其中一条干扰效率不低于70%）。

2.shRNA慢病毒载体构建

将三个shRNA分别克隆入慢病毒载体，构建shRNA干扰慢病毒载体，并进行测序鉴定构建成功。

汉恒生物多年来构建了用于各种用途的干扰慢病毒载体（HanBio^TM）。

1、pHBLV-U6-Puro;

2、pHBLV-U6-ZsGreen;

3、pHBLV-U6-ZsGreen-Puro.

二、目的基因干扰慢病毒载体的包装和浓缩

1.慢病毒载体的大量包装

大量扩增效率三组shRNA慢病毒载体和慢病毒的辅助质粒，将三个质粒按一定比例大量转染293T细胞，进行慢病毒颗粒的大量包装。

2. 慢病毒的浓缩

包装48小时后收集病毒，并对病毒进行体外大比例浓缩，得到有效滴度为10^8PFU/ml的慢病毒颗粒。

客户提供： 可以提供干扰序列也可不提供干扰序列。

汉恒生物提供： 三种干扰慢病毒，也可进行建系进行效率鉴定以筛选干扰效率最高的慢病毒（需要客户提供相关蛋白的抗体），提供10^8滴度的干扰慢病毒和对照慢病毒，均为1ml。