miRNA靶基因预测与检测

  简介

miRNAs与靶基因的3’UTR结合后，一般功能主要表现为抑制mRNA的翻译，为了检测其效果，我们可以用Western Blot的方法检测靶蛋白的表达水平，也可以用qRT-PCR进行检测靶标基因的表达。但是这两种方式都不能有效地说明是miRNAs直接起作用的结果。因此为了检测miRNA靶标的有效性，构建Sensor reporter并进行活性检测，才是对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确判断的方法。

 服务优势

（1）采用Promega公司特有psiCHECK质粒；

（2）所采用的Luciferase双荧光报告系统，可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度；

（3）采用瞬时转染技术，操作简便、快速，周期短，适用于绝大多数细胞类型。

服务流程

（1）PCR扩增靶基因的3’UTR，或直接合成结合位点序列；

（2）将上述确定的靶基因DNA片段克隆至报告基因载体psiCHECK质粒；

（3）克隆miRNA表达载体；

（4）将报告载体与miRNA表达载体共转染293T细胞；

（5）多功能酶标仪检测报告基因的表达水平；

（6）数据分析，整理提交客户原始数据及项目报告；

 注：为了实验的严谨性，可加入靶标基因3’UTR区microRNA预测结合区域的突变体作为对照，进一步说明问题。

附：psiCHECK质粒图谱

汉恒生物实例：

    汉恒生物通过合成mimics，构建可能靶基因的3’UTR报告基因系统成功验证miRNA与靶基因的关系。