Crispr/Cas9 慢病毒

 

服务简介

       

Cas9蛋白的CDS长达4kb，克隆难度和包毒难度都相对大，将Cas9基因高效导入细胞是应用Cas9/CRISPR系统进行基因敲除的难点之一，极大地限制可供选择的将基因导入细胞的方法。并且在用CRISPR/Cas9系统进行基因敲除时，还需要同时转入识别靶点的gRNA，筛选阳性细胞的抗性基因或荧光基因，用同源重组法进行基因敲除，还需要导入同源重组模板。如此多的基因共同表达，很难得到较高的基因编辑效率，造成后续的阳性克隆筛选和检测工作难度大。

汉恒生物独创性研发出慢病毒Cas9表达体系，该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白，构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系，再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件用于特异性基因敲除。

 

 

 产品优势

 

a、实验方案设计更灵活。由于不必表达大蛋白Cas9，可以根据细胞特性选择化学转染、腺病毒、腺相关病毒等多种方法导入或敲除相关基因；

 

b、提高基因敲除效率。在稳定表达Cas9蛋白的细胞系上进行基因敲除比瞬时转染Cas9进行基因敲除的效率更高；

 

c、可对同一细胞进行多个基因敲除实验。对于需要在同一个细胞系中进行多个基因的编辑或需要长期用一个细胞模型进行多项基因研究，先构建一个Cas9蛋白稳定表达的细胞系可显著提高后续实验的效率，降低实验难度。

 

 

服务特点

 

a、适用于在同一个细胞系中需要进行多个基因敲除的实验；

b、基因敲除效率比直接质粒转染更高；

c、提供多种不同荧光和抗性标记的慢病毒表达载体，更易筛选到基因敲除成功细胞；

d、接受cas9蛋白稳定表达不同细胞系定制。

 

 

服务流程

 

 

 

A、cas9载体构建及慢病毒包装

将cas9基因CDS区克隆至慢病毒载体，并进行cas9慢病毒包装。

B、稳定株筛选

将cas9慢病毒感染特定的目的细胞，进行cas9稳定表达的细胞株筛选。

 

 

参考文献

   1、MicroRNA-30 family members regulate calcium/calcineurin signaling in podocytes；

     （2016年发表于JCI，作者：刘志红）

   2、TGF-β1 promotes osteosarcoma cell migration and invasion through the miR-143-versican pathway；

     （2014年发表于Cellular Physiology and Biochemistry，作者：Shaohua Li and Tao Cheng）

   3、miR-451a Inhibited Cell Proliferation and Enhanced Tamoxifen Sensitive in Breast Cancer via Macrophage Migration Inhibitory Factor；

     （2015年发表于BioMed Research International，作者：李红）

   4、Smad4 mediated BMP2 signal is essential for the regulation of GATA4 and Nkx2. 5 by affecting the histone H3 acetylation in H9c2 cells；

     （2014年发表于Biochemical and Biophysical Research Communications，作者：田杰）

   5、Effects and mechanism of downregulation of COX‑2 expression by RNA interference on proliferation and apoptosis of human breast cancer MCF‑7 cells；

     （2014年发表于Molecular Medicine Reports，作者：hui Han）

   6、MicroRNA-486-5p targeting PIM-1 suppresses cell proliferation in breast cancer cells；

     （2014年发表于Tumor Biology，作者：Zhenlin Yang）

   7、Cyc1 silencing sensitizes osteosarcoma cells to trail-induced apoptosis；

     （2014年发表于Cell Physiol Biochem，作者：Ke Zhou, and Biao Cheng）

   8、MicroRNA-23a is involved in tumor necrosis factor-α induced apoptosis in mesenchymal stem cells and myocardial infarction；

     （2014年发表于Experimental and Molecular Pathology，作者：Yu Zhuang）

   9、Role of human pulmonary fibroblast-derived MCP-1 in cell activation and migration in experimental silicosis；

     （2014年发表于Toxicology and Applied Pharmacology）

   10、CXCR4-targeted near-infrared imaging allows detection of orthotopic and metastatic human osteosarcoma in a mouse model；

     （2015年发表于Scientific Reports，作者：周勇）

   11、Role of high-mobility group box 1 in methamphetamine-induced activation and migration of astrocytes；

     （2015年发表于Journal of Neuroinflammation，作者：姚红红）

   12、The role of MCPIP1 in ischemia/reperfusion injury-induced HUVEC migration and apoptosis；

     （2015年发表于Cell Physiol Biochem，作者：Jie Chao）

   13、P50-associated COX-2 extragenic RNA (PACER) overexpression promotes proliferation and metastasis of osteosarcoma cells by activating COX-2 gene；

     （2015年发表于Tumor Biology，作者：Jianru Xiao）

   14、CRCT1 regulated by microRNA-520 g inhibits proliferation and induces apoptosis in esophageal squamous cell cancer；

     （2015年发表于Tumor Biology，作者：Zhiming Chen）

   15、Overexpression of Hiwi Inhibits the Growth and Migration of Chronic Myeloid Leukemia Cells；

     （2015年发表于Cell Biochemistry and Biophysics，作者：Ziling Liu）

   16、RNF43 inhibits cancer cell proliferation and could be a potential prognostic factor for human gastric carcinoma；

     （2015年发表于Cell Physiol Biochem，作者：Lin Chen）

   17、ZC3H12D attenuated inflammation responses by reducing mRNA stability of proinflammatory genes；

     （2015年发表于Molecular Immunology，作者：Tao Jianga）

   18、MiR-146b-5p promotes metastasis and induces epithelial-mesenchymal transition in thyroid cancer by targeting ZNRF3；

     （2015年发表于Cell Physiol Biochem，作者：Xiaoping Zhang and Youben Fan）

   19、HSF1 Relieves Amyloid-β-Induced Cardiomyocytes Apoptosis；

     （2015年发表于Cell Biochemistry and Biophysics，作者：Beiru Zhang）

   20、Interaction between TNFR1 and TNFR2 dominates the clinicopathologic features of human hypopharyneal carcinoma；

     （2015年发表于Tumor Biology，作者：Qi Song）

   21、Periostin mediates TGF-β-Induced epithelial mesenchymal Transition in prostate cancer cells；

     （2015年发表于Cell Physiol Biochem，作者：Chuanyu Sun and Guowei Xia）

   22、CD49f acts as an inflammation sensor to regulate differentiation, adhesion, and migration of human mesenchymal stem cells；

     （2015年发表于STEM CELLS，作者：Ran Xiao）

   23、MCPIP1 regulates alveolar macrophage apoptosis and pulmonary fibroblast activation after in vitro exposure to silica；

     （2015年发表于Journal of Neuroinflammation ，作者：姚红红）

   24、MicroRNA-33b inhibits tumor cell growth and is associated with prognosis in colorectal cancer patients；

     （2015年发表于Clinical and Translational Oncology，作者：孙荣勋）

   25、MCPIP1 regulates alveolar macrophage apoptosis and pulmonary fibroblast activation after in vitro exposure to silica；

     （2015年发表于ToxSci Advance Access，作者：Jie Chao）

   26、miR‐152 induces human dental pulp stem cell senescence by inhibiting SIRT7 expression；

     （2015年发表于FEBS letters，作者：Jingping Liang）

   27、Lentivirus-mediated PHLDA2 overexpression inhibits trophoblast proliferation, migration and invasion, and induces apoptosis；

     （2015年发表于International Journal of Molecular Medicine，作者：Hui Li）

   28、miR-486-5p inhibits cell growth of papillary thyroid carcinoma by targeting fibrillin-1；

     （2015年发表于Biomedicine & Pharmacotherapy，作者：Jianqing Tian ）

   29、Over-expression of miR-451a can enhance the sensitivity of breast cancer cells to tamoxifen by regulating 14-3-3ζ, estrogen receptor α, and autophagy；

     （2016年发表于Life Sciences，作者：Li-Mimg Zhou、Yuan-Yuan Zhang ）

   30、MicroRNA-30a promotes chondrogenic differentiation of mesenchymal stem cells through inhibiting Delta-like 4 expression；

     （2016年发表于Life Sciences，作者：Ye Tian）

   31、MicroRNA-33 promotes the replicative senescence of mouse embryonic fibroblasts by suppressing CDK6；

     （2016年发表于Biochemical and Biophysical Research Communications，作者：Xinguang Liu ）

   32、Silencing of Paternally Expressed Gene 10 Inhibits Trophoblast Proliferation and Invasion；

     （2015年发表于PloS one，作者：Tao Meng）

   33、Repair of critical-sized bone defects with anti-miR-31-expressing bone marrow stromal stem cells and poly (glycerol sebacate) scaffolds；

     （2014年发表于European cells & materials，作者：Deng Yuan）

   34、MicroRNA-22 induces endothelial progenitor cell senescence by targeting AKT3；

     （2014年发表于Cell Physiol Biochem ，作者：Xu Z）

   35、A lentiviral sponge for miRNA-21 diminishes aerobic glycolysis in bladder cancer T24 cells via the PTEN/PI3K/AKT/mTOR axis；

     （2015年发表于Tumor Biology，作者：Changjun Yin）

   36、p53/PUMA expression in human pulmonary fibroblasts mediates cell activation and migration in silicosis；

     （2015年发表于Sci Rep，作者：Jie Chao）

   37、Endocytosis mediated by Caveolin-1 inhibits activity of matrix metalloproteinase-2 in human renal proximal tubular cells under hypoxia；

     （2016年发表于Int J Clin Exp Pathol，作者： Jun Dou ）

   38、MTSS1 suppresses cell migration and invasion by targeting CTTN in glioblastoma；

     （2015年发表于Journal of Neuro-Oncology，作者：Qigui Qi）

   39、PFDN1, an indicator for colorectal cancer prognosis, enhances tumor cell proliferation and motility through cytoskeletal reorganization；

     （2015年发表于Medical Oncology，作者：Minhua Zheng ）

   40、Human Dental Pulp Stem Cells via the NF-κB Pathway；

     （2015年发表于Cell Physiol Biochem，作者：Jingping Liang ）

   41、Clinical and therapeutic significance of sirtuin-4 expression in colorectal cancer；

     （2016年发表于Oncol Rep，作者：Peng Z）

   42、58-F, a flavanone from Ophiopogon japonicus, prevents hepatocyte death by decreasing lysosomal membrane permeability；

     （2016年发表于Sci Rep，作者：Xiaoling Wang）

   43、Study of Arsenic Sulfide in Solid Tumor Cells Reveals Regulation of Nuclear Factors of Activated T-cells by PML and p53；

     （发表于Sci Rep，作者：Chen S1）