microRNA技术概述
miRNA（microRNA）是一类长度约为20-24nt 的内源性非编码RNA，广泛参与基因转录后调控活动，其中多数miRNA具有高度序列保守性、表达时序性和组织特异性。
最近的研究表明，miRNA参与了各种各样的调节途径，包括细胞增殖与凋亡、生长发育、器官形成、造血过程、脂肪代谢、病毒防御等各种功能，具有重要的基因表达调控作用。
现在主流的芯片平台是Agilent和Affymetrix，Agilent只检出成熟体，而Affy的芯片前体和成熟体皆检出，假阳性率较高，但Affy的容量相比Agilent的大很多。 汉恒生物（Hanbio）提供Agilent和Affymetrix平台的mirarray筛选服务及后续的芯片数据分析及靶基因聚类分析。
检测原理
1. 针对Agilent miRNA芯片采用独特的茎环状探针设计；
2. miRNA成熟体3’端进行Cy荧光标记，这个新标记的C碱基将与探针序列中的G碱基杂交；
3. 探针形成的茎环结构起到了稳定杂交体，并限制miRNA前体杂交(A)；
4. 通过缩短形式的探针设计，降低杂交体稳定性，使多个探针的退火温度趋向 一致(B)。这种设计提高了杂交特异性和灵敏度。
技术优势
1. 特异性高：通过特殊的探针设计有效区分miRNA成熟体和miRNA前体，并有效区分序列高度相似的不同miRNA；
2. 灵敏度高：直接用Total RNA进行实验，无需miRNA分离过程，只需100ng的Total RNA即可用来进行标记实验；
3. 样品适用范围广：各种新鲜组织、冰冻组织、FFPE组织、脱落细胞等均可进行实验；
4. 动态范围广：检测丰度跨4个log，最高可达6个log。低至6000个拷贝的分子就可以检出；
5. 芯片更新迅速、定制方便：数据来源于Sanger 数据库最新版本；对于人、大鼠、小鼠之外的动物物种，可以方便的通过eArray进行定制。
- 浏览 12568 次
