荧光素酶检测试剂盒文件下载

萤光素酶（Luciferase）：是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Firefly)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，萤光素酶可以催化特定的萤光素底物转变成氧萤光素，同时发出强烈的光。

 

 萤火虫萤光素酶（firefly Luciferase，F-Luc）， 61kDa，可催化D-萤光素发出萤光

 海肾萤光素酶（Ranilla luciferase，R-Luc）， 36kDa，可催化腔肠素发出萤光

 

 

特点：

 

1.底物存在时，催化底物发出萤光

2.萤光亮度和萤光素酶的量成正比

 

 

根据荧光强度，反应表达载体上F-luc的表达量

 

 

那么萤光素酶在我们的实验中一般有什么应用呢？

 

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转录因子结合位点与启动子活性分析：

 

 转录因子（Transcription factors，TF）是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子，也称为反式作用因子，转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，从而增强其下游基因的表达。

萤光素酶报告基因实验是检测这类转录因子及其靶启动子中特异序列结合的重要手段

 

检测原理：

 

把转录因子构建到真核表达载体上进行过表达，启动子区段构建到萤光素酶报告载体上的F-Luciferase上游，持续性表达R-Luciferase的载体作为内参，共同转染到细胞内测定萤光素酶值，分析F-Luciferase活性即可反应转录因子与启动子结合后启动子的活性高低。

 

 

miRNA靶结合位点验证：

miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA分子，通过靶向结合目的基因的结合位点（通常位于基因的3端非编码区——3’UTR区），抑制其上游基因的表达。

鉴于miRNA的特点及luc的特性。miRNA及其靶结合位点的验证可以通过双萤光实验来实现：包括miRNA与其靶点相关分析，miRNA靶基因验证、lncRNA与circRNA 吸附miRNA验证等

 

 

检测原理：

 

   把miR潜在结合构建到报告载体上F-Luciferase下游，将报告载体与 miR的mimics共同转染到细胞内测定萤光素酶值，分析F-Luciferase活性即可反应miRNA与结合位点的结合特性