启动子是一段位于结构基因 5’-端上游区的 DNA 序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板 DNA准确地结合,并具有转录起始的特异性。基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物。它具有如下特征:
① 序列特异性。
在启动子的 DNA 序列中,通常含有几个保守的序列框,序列框中碱基 的变化会导致转录启动活性的改变。
② 方向性。
启动子是一种有方向性的顺式调控元件,有单向启动子和双向启动子两类。
③ 位置特性。
启动子一般位于所启动转录基因的上游或基因内的前端。处于基因的下 游或在基因的上游但离所要启动的基因太远的启动子,一般都不会起作用。
④ 种属特异性。
原核生物的不同种、属,真核生物的不同组织都具有不同类型的启动 子。但一般来说,亲缘关系越近的两种生物,其启动子通用的可能性越大。
没有启动子,基因就不能转录。原核生物启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷 酸序列组成,对 mRNA 的合成极为重要。
我们在质粒设计时都需要加入启动子序列,以保证目的基因的表达。启动子可分为诱导型启动子、组成型启动子和组织特异性启动子三大类。诱导启动子需要加入特定的药物才能激发或者抑制其活性,如四环素诱导TRE/TRE3G表达;
下一篇会为大家着重介绍我们的组织特异性启动子,今天先为大家介绍一下我们的组成型启动子:
"能够使基因在所有组织中都能启动表达的启动子称为组成型启动子。组成型启动子的调控不受外界条件的影响,所启动基因的表达具有持续性,但不表现时空特异性。"
U6 启动子
U6 是二型启动子,一般发现是启动小片段,不带 PolyA 尾的序列。由Ⅲ类 RNA 聚 合酶启动子 U6 启动子转录产生 shRNA,经剪切后产生成熟 siRNA,产生干扰效果。这一类启 动子在腺病毒和慢病毒干扰载体的构建中应用很多。U6 更多的是用在 shRNA 的启动,来达 到敲低一个基因的作用。
H1 启动子
RNA 聚合酶Ⅲ启动子,H1 RNA 是 RNase P 的一个组分,需在 3’端加上 5 个连续的 T 作为转录终止信号
比较:U6 和 H1启动子都属于真核生物RNA 聚合酶 III 第的三类,shRNA的表达量取决于启动子的强弱,U6 启动子比H1 强,表达持续时间较长,为首选。
CMV 启动子
CMV 是大家公认的启动真核基因表达的最有力量的启动子。相比较 H1/u6 启动子是属于 原核启动子,在真核细胞里面的启动效率非常低。
CMV 是三型启动子,长短都可以启动,可以启动 PolyA 尾的序列。一般插入某个基因的CDS 区到 CMV 启动子下游,CMV 负责启动该基因的表达,从而达到调高该基因表达的作用。在腺病毒和慢病毒过表达载体构建中应用最多。
比较:CMV 启动子活性较强,而 U6 启动子则较弱;CMV 启动子和 U6 启动子的转录终止序 列不同。当 shRNA 序列有连续 U/T 时应优先考虑 CMV 启动子载体
UBC(泛素启动子)
泛素广泛存在于真核生物,对调节细胞内蛋白周转,参与细胞多种生命活动有重要 作用,其在基因家族中的泛素启动子更是在增强基因表达的长期性,稳定性等方面有显著功效。人源性泛素启动子作为一种非病毒性的强启动子,将在基因治疗中起到举足轻重作用。人源性泛素基因家族包括 UbA,UbB,UbC。UbB 和 UbC 相互独立,分别由不同的调节基因调节。UbC 启动子在泛素启动子中属于较强的启动子。
CAG 启动子
CAG 是人工构建的组合启动子,由巨细胞病毒(the cytomegalovirus,CMV)早期增强子(early enhancer element)和鸡 β-肌动蛋白( chicken beta-actin )启动子组成,用于驱动基因在哺乳动物载体的高水平表达。
T7 启动子
T7 启动子是当今大肠杆菌表达系统的主流,这个功能强大兼专一性高的启动子经过巧妙的设计而成为原核表达的首选,尤其以 Novagen 公司的 pET 系统为杰出代表。强大的 T7 启动子完全专一受控于 T7 RNA 聚合酶,而高活性的 T7 RNA 聚合酶合成 mRNA 的速度比大 肠杆菌 RNA 聚合酶快5倍——当二者同时存在时,宿主本身基因的转录竞争不过 T7 表达系 统,几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白;诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的 50%以上。
由于大肠杆菌本身不含 T7 RNA 聚合酶,需要将外源的 T7 RNA 聚合酶引入宿主菌,因而 T7 RNA 聚合酶的调控模式就决定了 T7 系统的调控模式——非诱导条件下,可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录,从而避免目的基因毒性对宿主细胞以及质粒稳定性的影响;通过控制诱导条件控制 T7 RNA 聚合酶的量,就可以控制产物表达量, 某些情况下可以提高产物的可溶性部分。
组成型启动子就带领大家了解到这咯,除了上文介绍的这些,组成型还有许多其他经典的启动子,我们就不在这篇文章里一一赘述了。下一篇我们将带领大家了解组织特异性启动子,为大家带来更多启动子相关知识!
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