荧光素酶（firefly）检测试剂盒

 

 

产品包装和保存条件

 

 

 

 

试剂盒于-20℃保存。Lysis Buffer -20℃可保存一年。反应试剂（Luciferase Reaction Reagent）加入底物后，分装、避光保存；-70℃可保存一年，-20℃可保存一个月；避免反复冻融。试剂使用前需平衡至室温。

 

 

 

实验原理

 

 

萤火虫萤光素酶（firefly luciferase, fluc）能催化萤光素（luciferin）产生生物萤光反应，反应过程如下图所示。

 

 

 

 

本检测试剂盒以萤光素为底物，检测萤光素酶（firefly）报告基因的活性。该方法具有操作简单、检测快捷、灵敏度高等优点。

 

 

实验步骤

 

1.配制试剂

 

（1）Lysis Buffer：

Lysis Buffer (5X) 用水稀释5倍，配制成工作液；

 

（2）Luciferase Reaction Reagent：

用Luciferase Reaction Buffer（10 ml）溶解Luciferase Reaction Substrate干粉（短暂离心再开盖），混匀后分装、避光保存，避免反复冻融。

 

 

2.裂解细胞

 

细胞裂解时密度应小于95%，细胞生长过密，易导致裂解不充分；质粒瞬转、病毒感染细胞后，需培养一段时间（一般48小时）使萤光素酶充分表达；调节实验参数，以满足上述条件；

 

去除培养基，用PBS润洗一遍，注意不要将细胞吹起；加入适量的Lysis Buffer，推荐用量见下表；

 

 

 

将细胞培养板置于摇床上，室温、轻晃孵育15分钟；

将裂解物转移到新的EP管中，4℃、12,000rpm离心1分钟，取上清备用。

 

 

3.萤光检测

 

取20μl裂解物，加入100μl平衡至室温的Luciferase Reaction Reagent，混匀后于酶标仪中检测fLuc信号。