转基因小鼠

   

简介

 

转基因小鼠的研发一般是通过DNA显微注射的办法，将外源目的基因注射到小鼠受精卵内，使外源目的基因整合到小鼠基因组；导入基因可以通过遗传传给子代。

 

汉恒生物提供转基因小鼠研发技术服务，主要包括有基因克隆、载体构建、鉴定、DNA显微注射、首代转基因小鼠（founder）的鉴定等内容。

 

 

汉恒根据客户的不同需求可以提供以下转基因小鼠

 

1. 过表达转基因小鼠

 

2. RNAi转基因小鼠

 

3. microRNA转基因小鼠

 

4. BAC转基因小鼠

 

5. 可诱导性表达的转基因小鼠

 

6. TALEN定点转基因小鼠

 

 

具体案例描述

 

制备原理：

 

制作转基因大鼠最常用的一种方法是DNA原核显微注射。DNA原核显微注射是指将外源DNA通过显微注射的方法注射到受精卵的原核内，注射DNA整合到大鼠受精卵的基因组中，并稳定遗传给后代。注射发生在受精卵发育前期，即两个原核时期，这两个原核分别来自于卵母细胞和精子，随后这两个原核将发生融合，注射DNA整合到染色体中 。

 

大鼠品系： SD × SD

 

服务成果承诺：

 

提供3只PCR阳性首建鼠

 

服务流程：

 

质粒/BAC载体构建及线性化 →原核显微注射及受精卵移植 →大鼠出生 →大鼠的鉴定

 

 

服务流程示意图

 

 

 

载体构建：

 

 

您也可以自行构建载体，由汉恒生物进行DNA提取和纯化，客户提供自己制备的DNA需要注意以下事项：

 

 

1、制备用于显微注射的DNA必须高纯度，无污染（包括酒精、盐等）；

 

 

2、提供DNA的浓度应大于100 ng/μL，至少50μL，提供的BAC DNA浓度应大于40 ng/μL，体积至少100μL；

 

3、显微注射用的DNA应线性化，BAC DNA则无需线性化；

 

 

4、DNA的胚胎致死性可能与DNA的结构类型有关。

 

显微注射：

 

将质粒DNA/BAC 注射到受精卵中，然后回送到代孕母鼠体中。经过约3周左右大鼠出生， 在大鼠出生后7天左右，我们将取其脚趾进行基因型鉴定。大鼠出生后3周，将其断乳并隔离单独饲养，大鼠4周大小（1周后）即可发送到研究者手中。

 

大鼠鉴定：

 

 

用DNA原核显微注射的方法建立的转基因大鼠，外源基因在大鼠基因组上的插入是随机的，并且常呈现成串的头尾相接的多拷贝的插入，拷贝数可以高达几十个。外源基因在染色体上的插入位点一般是一个，少数情况下也可能是多位点插入。我们通常采用PCR的方法来鉴定外源基因是否成功的整合到大鼠基因组中。 大鼠出生后大约7天左右，剪取其脚趾并提取基因组进行PCR鉴定，检测目的基因是否整合到大鼠基因组中。

 

转基因大鼠（GFP）脚趾鉴定荧光图片