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细胞功能学分析实验概述

一、增殖实验

1. MTT/CCK8

2. BrdU渗入实验(需要标记FITC,和GFP一般不兼容)

3. Ki67免疫荧光实验(需要标记荧光,和GFP/RFP等荧光标记一般不兼容)

推荐抗体abcam cat. Ab16667

4. Cellcycle 流式细胞检测实验

5. 克隆形成实验colony forming assay

1) 平板克隆形成试验(贴壁细胞适用)

2) 软琼脂培养克隆形成试验(悬浮细胞等适用)

二、凋亡实验

1. AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡(早期凋亡,需要标记FITC,和GFP一般不兼容)

2. TUNEL法检测细胞凋亡(晚期凋亡)

一般采用Roche的一步法kit,需要标记FITC,和GFP一般不兼容。

3. Caspase3/8/9 Western Blot 检测

4. DNA Ladder (现在极少用)

5. 彗星实验(现在极少用)

三、迁移、侵袭实验

1. 划痕实验

2. Transwell实验检测迁移(不需要Matrigel

3. Transwell实验检测侵袭(需要Matrigel

四、内皮成管实验

通过condition medium 或者coculture模型,检测肿瘤细胞对内皮成管能力的影响:HUVEC Matrigel tube formation Model

五、细胞移植动物实验

1. 裸鼠成瘤实验检测成瘤能力

2. 小动物活体成像实验(需要荧光标记,最好是Luciferase,可深度观测,RFP次之,GFP效果最差,只有皮下才能检出信号)

3. 移植后的血液/组织液中物质检测(LDH等)

六、分子生物学与蛋白实验

1.  Western Blot检测下游通路变化

2.  Co-IP  (最好带FLAGHis tag

3.  免疫荧光 (与之前的所带的荧光通道GFP/RFP等不兼容)

七、其他分子探针型细胞功能学检测

1.  ROS检测:DCF法(绿光发射波长,和GFP不兼容), DHE 法 (红光发射波长,与RFP不兼容)

2.  线粒体膜电位:JC-1(与GFPRFP皆不兼容);TMRETMRM:(和RFP不兼容)

3.  Ca2+Indo-1,Fura-2,FLuo-4等,和GFP不兼容)

注:其他探针不一一列举。

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