一、增殖实验
1. MTT/CCK8
2. BrdU渗入实验(需要标记FITC,和GFP一般不兼容)
3. Ki67免疫荧光实验(需要标记荧光,和GFP/RFP等荧光标记一般不兼容)
推荐抗体: abcam cat. Ab16667
4. Cellcycle 流式细胞检测实验
5. 克隆形成实验colony forming assay
1) 平板克隆形成试验(贴壁细胞适用)
2) 软琼脂培养克隆形成试验(悬浮细胞等适用)
二、凋亡实验
1. AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡(早期凋亡,需要标记FITC,和GFP一般不兼容)
2. TUNEL法检测细胞凋亡(晚期凋亡)
一般采用Roche的一步法kit,需要标记FITC,和GFP一般不兼容。
3. Caspase3/8/9 Western Blot 检测
4. DNA Ladder (现在极少用)
5. 彗星实验(现在极少用)
三、迁移、侵袭实验
1. 划痕实验
2. Transwell实验检测迁移(不需要Matrigel)
3. Transwell实验检测侵袭(需要Matrigel)
四、内皮成管实验
通过condition medium 或者coculture模型,检测肿瘤细胞对内皮成管能力的影响:HUVEC Matrigel tube formation Model
五、细胞移植动物实验
1. 裸鼠成瘤实验检测成瘤能力
2. 小动物活体成像实验(需要荧光标记,最好是Luciferase,可深度观测,RFP次之,GFP效果最差,只有皮下才能检出信号)
3. 移植后的血液/组织液中物质检测(LDH等)
六、分子生物学与蛋白实验
1. Western Blot检测下游通路变化
2. Co-IP (最好带FLAG或His tag)
3. 免疫荧光 (与之前的所带的荧光通道GFP/RFP等不兼容)
七、其他分子探针型细胞功能学检测
1. ROS检测:DCF法(绿光发射波长,和GFP不兼容), DHE 法 (红光发射波长,与RFP不兼容)
2. 线粒体膜电位:JC-1(与GFP、RFP皆不兼容);TMRE、TMRM:(和RFP不兼容)
3. Ca2+(Indo-1,Fura-2,FLuo-4等,和GFP不兼容)
注:其他探针不一一列举。
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