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慢病毒滴度测定方法简介(表达荧光的慢病毒)

Day 0： 将生长状态良好的 293T 细胞消化计数后稀释至1´10⁵/ml, 加入96孔板，100 ml/孔(1´10⁴ 个细胞)，每种病毒需要6个孔。放入37℃，5% CO₂ 培养箱中培养过夜。

Day 1:  在 EP 管中做10倍梯度稀释，连续6个稀释度。稀释方法如下：每种病毒准备6个1.5 ml EP 管，每管加入90 ml完全培养基，往第一个管中加入10 ml病毒原液，混匀后，吸取10 ml 加入第二个管混匀。以此类推。然后把稀释好的病毒和细胞孵育过夜。

Day 2：吸去带有病毒的培养液，在每个孔中再加入100 ml 完全培养液，以利于细胞的生长。

Day 3：显微镜观察荧光。此时荧光会有初步表达。

Day 4：在荧光显微镜下观察结果，对荧光比例合适（10-30%之间）的孔进行细胞计数，并计算滴度。其计算公式如下:

滴度（TU/ml）=细胞数´荧光百分比´10³/病毒原液体积 (ml)。

举例：③号管对应孔的荧光比例为30%，细胞总数为8´10⁴，

滴度（TU/ml）=8´10⁴´30%´10³/0.1=2.4´10⁸

如果要感染2×10⁵个细胞，MOI=30（1个细胞对应30个病毒粒子）（见下注），则需要病毒体积为=2×10⁵´30/2.4´10⁸（ml）=0.025 ml=25 ml.

注：MOI值: MOI 是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数,实际的含义即为每个细胞被多少个有活力病毒所感染。各种细胞的最适MOI值有差别，请客户正式实验前先进行预实验摸索最适MOI。