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滴度测定方法简介

1、 细胞准备 将生长状态良好的 293T 细胞消化计数后稀释至1x105/ml， 加入96孔板，100ul/孔，为每个病毒准备6 个孔。放入37℃，5%CO2 培养箱中培养。

2、 加病毒 第二天，在 EP 管中做3 倍梯度稀释，连续6 个稀释度。稀释方法如下：每种病毒准备6 个1。5mlEP 管，每管加入90ul 培养液，往第一个管中加入10ul 病毒原液，混匀后，吸取10ul 加入第二个管混匀。以此类推，做十个稀释度（10~3*10-3）。

3 、追加培养液 第三天，吸去带有病毒的培养液，在每个孔中再加入100ul 完全培养液，以利于细胞的生长。

4、观察结果并计算滴度 第五天，在荧光显微镜下观察结果。滴度（PFU/ml）=细胞数*荧光百分比*MOI*病毒稀释倍数*103